HPLC概念

== 色譜理論 ==

色譜法的分離原理：溶于流動相（ phase）中的各組分經過固定相時，由于與固定相（stationary phase）之間的相互作用（吸附、分配、離子吸引、排阻、親和）的大小、強弱不同，樣品各組分在固定相與流動相中的溶解各不相同,從而經過固定相時的滯留時間不同，先后從固定相中流出時間各不相同。
    液相色譜法開始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動相，稱為經典液相色譜法，此方法柱效低、時間長（常有幾個小時）。液相色譜法（High performance Liquid Chromatography，HPLC）是在經典液相色譜法的基礎上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發展起來的。它與經典液相色譜法的區別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需用高壓輸送流動相，故又稱高壓液相色譜法（High Pressure Liquid Chrmatography，HPLC）。又因分析速度快而稱為高速液相色譜法（High Speed Liquid Chrmatography ，HSLP）。也稱現代液相色譜。

    == 色譜常用術語 ==
·色譜圖（Chrmatography）——樣品流經色譜柱和檢測器，所得到的信號-時間曲線，又稱色譜流出曲線（elution profile）。
·基線（base line）——經流動相沖洗，柱與流動相達到平衡后，檢測器測出一段時間的流出曲線。一般應平行于時間軸。
·噪音（noise）——基線信號的波動。不正常的噪音通常因電源接觸不良或瞬時過載、檢測器不穩定、流動相含有氣泡或色譜柱被污染所致。
·漂移（drift）——一段時間內基線隨時間的緩緩變化。
·色譜峰（peak）——組分流經檢測器時響應的連續信號產生的曲線。或色譜曲線上的突起部分。
·拖尾因子（tailing factor，T）——用以衡量色譜峰的對稱性。也稱為對稱因子（symmetry factor）或不對稱因子（symmetry factor）。

T=W_0.05h\\2d₁

W_0.05h：0.05峰高處的峰寬

d₁：峰極大到峰前沿之間的距離

·峰底——基線上峰的起點至終點的連線。
·峰高（peak height,h）——峰的zui高點至峰底的距離。
·峰寬（peak width,W）——峰兩側拐點處所作兩條切線與基線的兩個交點間的距離。W＝4σ
·半峰寬（peak width at half-height，W_h/2）——峰高一半處的峰寬。W_h/2＝2.355σ
·標準偏差（standard deviation，σ）——正態分布曲線x＝±1時（拐點）的峰寬之半。正常峰的拐點在峰高的0.607倍處。標準偏差的大小說明組分在流出色譜柱過程中的分散程度。σ小，分散程度小、極點濃度高、峰形瘦、柱效高；反之，σ大，峰形胖、柱效低。
·峰面積（peak area，A）——峰與峰底所包圍的面積。A＝2.507 σ h＝1.064 W_h/2 h
·死時間（dead time，t₀）——不保留組分的保留時間。
·死體積（dead time，V₀）——由進樣器進樣口到檢測器流動池未被固定相所占據的空間。它包括4部分：進樣器至色譜柱管路體積、柱內固定相顆粒間隙（被流動相占據，Vm）、柱出口管路體積、檢測器流動池體積。其中只有Vm參與色譜平衡過程，其它3部分只起峰擴展作用。為防止峰擴展，這3部分體積應盡量減小。V₀＝F×t₀（F為流速）
·保留時間（retention time，t_R）——從進樣開始到某個組分在柱后出現濃度極大值的時間。
·保留體積（retention volume，V_R）——從進樣開始到某組分在柱后出現濃度極大值時流出溶劑的體積。VR＝F×t_R
·調整保留時間（adjusted retention time，t'_R）——扣除死時間后的保留時間。t'R＝tR－t0
·調整保留體積（adjusted retention volume，V'_R）——扣除死體積后的保留體積。V'_R＝V_R－V₀或＝F×t'_R
·理論塔板數（theoretical plate number，N）——用于定量表示色譜柱的分離效率（簡稱柱效）。
·理論塔板高度（theoretical plate height，H）——每單位柱長的塔板數。
·分配系數（distribution coefficient，K）——在一定溫度下，化合物在兩相間達到分配平衡時，在固定相與流動相中濃度之比。

K= C_S/C_M

C_S：為組分在固定相中的濃度

C_M：為組分在流動相中的濃度

·容量因子（capacity factor，k'）——化合物在兩相間達到分配平衡時，在固定相與流動相中的量之比。
·選擇性（selectivity factor，α）——相鄰兩組分的分配系數或容量因子之比。
·分離度（resolution，R）——相鄰兩峰的保留時間之差與平均峰寬的比值。也叫分辨率，表示相鄰兩峰的分離程度。